技術簡介

蛋白的酵母雙雜交實驗是以酵母的遺傳分析為基礎，研究蛋白間相互作用的一種有效技術手段。轉錄活化蛋白可以和DNA 上特異的序列結合而啟動相應基因的轉錄反應。這種DNA 結合與轉錄激活的功能是由其上兩個相互獨立的結構域，即DNA 結合結構域(Binding Domain, BD)和轉錄活化結構域(Activation Domain, AD)共同完成的。

以Gal4 系統為例，BD和AD 分別由Gal4 蛋白上不同的兩個結構域(1-147aa 與768-881aa)構成。在利用GAL4 系統篩選cDNA 文庫或研究蛋白間的相互作用時，DNA 結合結構域與靶蛋白即"誘餌"相結合，轉錄活化結構域與文庫蛋白或要驗證的蛋白相結合。一般情況下，單獨的BD 可以與GAL4 上游活化序列（GAL UAS）結合但不能引起轉錄，單獨的AD 則不能與GAL UAS 結合；只有當BD 與 AD 分別表達的融合蛋白由于相互作用而導致兩者在空間上相互靠近時，BD 與AD 才能與 GAL UAS結合并且引起報道基因的轉錄，從而激活下游報告基因，通過這一系列實驗來驗證兩個蛋白之間的相互作用。

服務內容

技術優勢

1. 專業的技術團隊使您的實驗高效、準確；

2. 豐富的分子實驗基礎，尤其在酵母雜交中積累了大量的實踐經驗，有成熟的實驗技術，滿足客戶不同的實驗需求

服務流程(圖)

酵母雙雜交文庫構建——誘餌載體構建——誘餌載體自激活檢測——文庫質粒和誘餌質粒共轉酵母感受態細胞——文庫篩選、分析

您需要提供以下材料

1.  新鮮組織材料、凍存材料或高質量RNA、誘餌基因的模板

2. 盡可能全面的實驗相關信息

交付數據及產品

1. 構建好的雙雜交文庫甘油菌：

1）文庫容量≥10⁶；

2）文庫滴度>10⁷cfu/ml；

3）插入片段平均大于500bp（不同物種略有差別）；

4）減低高豐度表達基因10-100倍；

2. 酵母雙雜交篩選得到的陽性克隆；

3. 實驗過程報告及相關數據圖片

實驗結果圖片示例：