
載體構建
技術簡介
載體(vector construction),為把DNA分子運送到受體細胞中去,必須尋找一種能進入細胞、且裝載了外來的DNA片段后仍能照樣復制的載體。理想的載體是質粒(plasmid),在基因工程中,常用人工構建的質粒作為載體。載體構建即是構建含外源DNA的質粒。
載體構建((vector construction),載體是整個基因工程的基石,是DNA重組技術的核心要素。為了滿足研究的需要,我們需要按照自己的意愿有目的的去構建和改造載體,最終實現擴增目標片段或者特定蛋白表達等目的。
服務內容
| 服務項目 | 分類 |
| 目的片段克隆 | 目的基因片段插入特定載體多克隆位點上,可按客戶要求融合表達不同的報告基因、蛋白標簽等 |
| 載體元件改造 | 多克隆位點改造,啟動子、增強子、篩選標記等功能元件的改造 |
常見服務
| 載體種類 | 載體類型 | 周期 |
| 原核表達載體 | 蛋白純化pET系列;pGEX-4T-1;等 雙元啟動子載體 | 10~15天 |
| 真核表達載體 | pCDNA3.1;pEGFP-N1;pEGFP-C1; pDsRed-Monomer-N1等 | 10~15天 |
| 啟動子活性檢測載體 | pGL3-BASIC;pGL4.17等 | 10~15天 |
| 植物表達/干擾載體 | pCAMBIA系列;等 | 20~25天 |
| 酵母表達載體 | pPIC9k; pYES2等 | 10~15天 |
| 慢病毒載體 | 慢病毒基因表達載體pCDH-Puro; pCDH-GFP-Puro; 慢病毒干擾載體pLKO.1 | 20~25天 |
| 腺病毒及腺相關載體 |
|
|
| CRISPR/Cas9系統載體 |
|
|
注:我司現有載體庫幾乎覆蓋實驗室常用的各類載體,可為客戶免費提供;也可完成客戶提供載體的構建服務。
技術優勢
雖然載體構建是分子生物學研究中最常用的技術之一,但由于構建目的的多樣性,加之實際操作中影響因素較多,對研究者經驗要求較高,因而往往費時費力。
本公司擁有長期從事分子生物學工作的豐富經驗,集中人力,為您提供高效、快捷的載體構建服務。我們可根據已有載體進行改造方案的設計,完成現有載體不同功能元件的改造,也可以應客戶要求將指定片段亞克隆至各種載體。
服務流程(圖)
基因全合成或基因克隆(此技術服務可選,客戶只需提供基因序列或組織材料即可)——序列審核、引物設計——目的基因片段與載體連接——陽性克隆篩選——測序驗證
您需要提供的材料
1. 實驗材料與相關資料
普通載體構建改造:載體、PCR或者酶切產物、載體圖譜、載體來源信息與基因背景資料;
表達載體、報告基因載體、病毒載體:載體、含目的基因的質粒或cDNA模板、載體圖譜與序列信息、目標蛋白基因序列與酶切位點信息。
2. 載體構建與改造方案
注:
1. 請確認待改造的載體序列正確,與提供的圖譜等信息匹配,構建完成后如需測序并且要求序列完全匹配,則需要您提供全序列信息;
2. 如果您只提供組織或細胞樣本,請提供所需克隆基因的NCBI登錄號或電子版全序列,并額外收取RNA提取及逆轉錄的費用;
3.對于本公司已有的載體和模板,我們可以免費提供,詳見 載體庫。
您將獲得以下實驗結果
1.實驗報告:包括序列信息、測序引物、所用酶切位點信息等;
2.測序結果:測序彩色波形圖、測序方向圖、序列堿基圖;
3.構建好的重組質粒(100ng/μL,20μL)及相應的甘油保存菌(1mL)。
實驗結果圖片示例:
